Parâmetros de validação de métodos (Parte 2)
Dando continuidade à discussão sobre a validação de métodos de PCR, este texto complementa a abordagem de parâmetros essenciais para garantir a confiabilidade dos resultados e sua adequação ao uso pretendido. Após discutirmos conceitos como sensibilidade e especificidade analítica, robustez e precisão, neste artigo exploramos outros critérios igualmente importantes no processo de validação. Confira:
• Eficiência de amplificação: Refere-se à capacidade da PCR de duplicar a quantidade de DNA alvo a cada ciclo. A eficiência ideal é de 100%, indicando que o DNA dobra a cada ciclo. Esse valor é estimado a partir da inclinação da curva padrão construída com diluições seriadas conhecidas do alvo. Eficiência baixa reduz sensibilidade e precisão, enquanto alta (geralmente artefato) pode indicar amplificação não específica ou erros técnicos, prejudicando a validade dos resultados.
• Sensibilidade diagnóstica: Indica a capacidade do teste em detectar corretamente indivíduos que possuem o patógeno ou condição de interesse (verdadeiros positivos), evitando que passem despercebidos. A alta sensibilidade reduz a ocorrência de falsos negativos, permitindo a correta identificação e o diagnóstico clínico dos casos positivos. Este parâmetro é determinado pela comparação com um método de referência (padrão ouro).
• Especificidade diagnóstica: Avalia a capacidade do teste de identificar corretamente indivíduos sem o patógeno ou condição (verdadeiros negativos), seja por reações cruzadas, inespecíficas ou artefatos da amplificação. A alta especificidade minimiza falsos positivos, evitando diagnósticos incorretos e intervenções desnecessárias. Também é avaliada contra um método de referência (padrão ouro). Um teste altamente específico é fundamental para a segurança diagnóstica e para evitar implicações clínicas indevidas.
Em suma, um método de PCR validado deve demonstrar sensibilidade, especificidade, precisão e eficiência de amplificação, garantindo que os resultados obtidos sejam reprodutíveis e fidedignos em diferentes condições e para diferentes amostras. A garantia desses parâmetros é importante para a confiabilidade e a adequação do teste a aplicações diagnósticas ou analíticas, além de ser fundamental para o cumprimento de exigências regulatórias. A Simbios Biotecnologia, com sua expertise nesse processo, está à disposição para auxiliar seus parceiros na condução de validações. Entre em contato para mais informações e suporte técnico especializado.
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