Definição de sorotipos de Salmonella enterica pela ribotipagem da sequência intergênica
O acesso ao diagnóstico confiável para caracterizar Salmonella em programas de monitoramento é essencial à segurança alimentar. A sorotipagem é ferramenta epidemiológica importante na caracterização de isolados de Salmonella, permitindo determinar a prevalência e surgimento de sorotipos nas diferentes regiões de produção.
A ribotipagem de sequencia intergênica (ISR) avalia variações genotípicas associadas a sorotipos específicos pela análise de região entre os genes dos RNAs ribossomais 23S e 5S do operon rrnH. A técnica é específica, apresentando elevado poder discriminatório, reprodutibilidade e repetibilidade em comparação com o esquema tradicional de sorotipagem pelo método de Kauffman-White (KW)* (1,2,3). Apresenta como vantagem adicional a não ocorrência de interferência devido à expressão variável de antígenos de superfície celular. Também acrescenta informação crítica às frequentes situações que limitam o diagnóstico à simples determinação da presença ou ausência de Salmonella, ou ao reconhecimento de poucos sorotipos.
A ISR foi comparado pela AOAC (Association of Official Analytical Chemists) ao método de microarranjo de hibridização de DNA (DNA Hyb, Certificado Internacional 121001) demonstrando resultados equivalentes, com vantagens do custo substancialmente menor (1). Esta técnica também identifica novas variantes genéticas, que progressivamente passam a ser relacionadas com os novos sorotipos determinados, tanto pelo DNA Hyb, quanto pelo KW, conforme se expandam as informações disponibilizadas por laboratórios de referência. Por fim, ilustram altos graus de correlação, frequentemente superior a 90%, entre as técnicas moleculares (ISR e DNA Hyb) e o tradicional KW, destacando como causas principais nas discrepâncias:
- misturas de sorotipos numa mesma cultura, detectáveis por alguns métodos, mas não outros;
- variações na interpretação da imunoreatividade do antígeno Flagelar H e
- emergência de variante genética, que pode passar a representar um novo genótipo.
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* Kauffman-White (KW) é o método tradicional para sorotipagem de S. entérica, baseado em anticorpos. Os resultados positivos são gerados numa fórmula baseada em detalhes estruturais do antígeno H, de flagelos, e do antígeno O, de lipopolissacarídeos.
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BIBLIOGRAFIA
1. GUARD, Jean et al. Comparison of dkgB-linked intergenic sequence ribotyping to DNA microarray hybridization for assigning serotype to Salmonella enterica. FEMS microbiology letters, v. 337, n. 1, p. 61-72, 2012.
2. MORALES, Cesar A.; GAST, Richard; GUARD-BOULDIN, Jean. Linkage of avian and reproductive tract tropism with sequence divergence adjacent to the 5S ribosomal subunit rrfH of Salmonella enterica. FEMS microbiology letters, v. 264, n. 1, p. 48-58, 2006.
3. PULIDO-LANDÍNEZ, Martha et al. Assignment of serotype to Salmonella enterica isolates obtained from poultry and their environment in Southern Brazil. Letters in applied microbiology, v. 57, n. 4, p. 288-294, 2013.
4. GUARD, Jean et al. Comparison of dkgB-linked intergenic sequence ribotyping to DNA microarray hybridization for assigning serotype to Salmonella enterica. FEMS microbiology letters, v. 337, n. 1, p. 61-72, 2012.
