Limpeza e descontaminação – Bancadas, superfícies e áreas de trabalho
A PCR é uma técnica poderosa, que gera grandes quantidades de DNA a partir de pequenas quantidades iniciais. No entanto, esta inerente sensibilidade analítica gera um risco, o de contaminação cruzada nos analitos. Os amplicons, cópias do DNA amplificadas pela PCR, podem disseminar pelo laboratório na forma de aerossóis, gerando resultados falso-positivos e prejudicando a qualidade dos testes de laboratório.
Para minimizar o risco de contaminação cruzada, o laboratório deve seguir rigorosamente as medidas de boas práticas (BPL). Neste texto, abordaremos a importância da limpeza e descontaminação em bancadas, superfícies e áreas de trabalho, aplicando irradiação UV e utilizando soluções de cloro (hipoclorito de sódio) e etanol.
- A irradiação com luz ultravioleta UV (254 nm) é um procedimento simples, que desintegra o DNA, causando a formação de dímeros que impedem a contaminação cruzada. As limitações estão relacionadas à posição e alcance da luz UV, uma vez que a radiação diminui à medida que a distância entre a fonte de luz e a superfície aumenta. É eficaz somente em pequenas áreas de trabalho, como, por exemplo, cabines de PCR, sendo recomendada a aplicação por no mínimo 30 minutos. A descontaminação com luz UV em equipamentos e superfícies irregulares requer cuidado adicional e um tempo de exposição mais prolongado.
- O hipoclorito de sódio, também conhecido como água sanitária, é agente oxidante bastante utilizado que apresenta alta eficácia para a descontaminação de amplicons. Interfere na estrutura e ligação do DNA, promovendo a degradação. Seu êxito depende da concentração de cloro livre disponível. Soluções de 0,9 a 2,5% mostram-se bastante eficientes na descontaminação de amplicons. A solução deve ser aplicada diretamente nas superfícies de trabalho e equipamentos, deixando agir por 15 a 30 minutos. Após esta operação é possível remover os resíduos de hipoclorito com água destilada, pois o reagente pode ser corrosivo e causar danos, especialmente quando aplicado sobre equipamentos e materiais. Vale ressaltar que o hipoclorito de sódio é incompatível com produtos que contenham Tiocianato de Guanidina, como é o caso de reagentes Prep e Preamp NewGene.
- O etanol 75% é agente desinfetante amplamente utilizado, com ação antisséptica contra diversos microrganismos. Em laboratórios de biologia molecular, o etanol 75% também é usado para reduzir a contaminação por amplicons, embora com menor eficiência que o hipoclorito. Seu uso é recomendado em combinação com outros métodos, como a irradiação com luz UV, para potencializar a eficácia. De aplicação bastante simples, torna-se vantajoso no uso diário, antes e depois de todo procedimento de PCR.
- Outros descontaminantes comerciais oferecem soluções convenientes e eficazes, sendo propostos para diversas aplicações laboratoriais. Consulte-nos em caso de dúvida!
A descontaminação de amplicons em superfícies de trabalho é procedimento fundamental e assegura a confiabilidade e qualidade dos resultados do laboratório de biologia molecular. Compartilhe suas dúvidas ou comentários! Estamos aqui para discutir ideias e enriquecer as boas práticas de laboratório de biologia molecular.
