BOAS PRÁTICAS EM PCR | Técnica de pipetagem é crucial para exatidão de resultados
Você sabia que grande parte da variabilidade analítica – grau de incerteza ou imprecisão nos exames laboratoriais – pode estar relacionada a uma pipetagem falha?
Na execução de uma reação de qPCR, uma boa técnica de pipetagem é crucial para que tudo dê certo, resultando em exatidão e precisão e atingindo a garantia de resultados confiáveis, reprodutíveis, com baixa variabilidade e livre de contaminações.
No tópico de hoje da série Boas Práticas em PCR e com base nas práticas adotadas na Simbios Biotecnologia ao longo destes quase 30 anos de atuação, trazemos de forma sucinta algumas dicas para uma boa pipetagem:
Calibre as micropipetas regularmente: para garantir exatidão e precisão, as micropipetas devem ser calibradas de acordo com as instruções do fabricante e em intervalos regulares.
Escolha a pipeta adequada: somente use a pipeta na faixa de volume indicada.
Utilize ponteiras adequadas: é importante usar ponteiras próprias para aplicações de PCR e com bom encaixe na micropipeta utilizada. Prefira ponteiras feitas de materiais com baixa ligação ao DNA/RNA, como polipropileno. Dê preferência para o uso de ponteiras com barreira para evitar contaminação.
Temperatura correta: reagentes e equipamentos devem estar em temperatura ambiente antes de iniciar a pipetagem.
Faça o pré-enxágue da ponteira: adote movimentos de “puxar para cima e para baixo” (pelo menos 3X) antes de aspirar o volume. Isto reduz a perda de líquidos e aumenta a precisão. Em algumas situações, também serve para homogeneizar o líquido a ser pipetado.
Execute uma boa técnica: evite tocar nas laterais do tubo com a ponteira, segurando a micropipeta em um ângulo de 90° em relação ao tubo, mantendo um ritmo constante e padronizado. É importante aspirar o líquido devagar e com cuidado, sempre com a ponta imersa no líquido, com o cuidado para não remover a ponteira antes da completa aspiração. Utilize corretamente os estágios da micropipeta.
Troque as ponteiras com frequência: a cada reagente ou a cada amostra, para evitar contaminação.
Armazene as pipetas adequadamente: após o uso, devem ser armazenadas na posição vertical para evitar qualquer dano ao êmbolo ou pistão.
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