BOAS PRÁTICAS EM PCR | Organização do espaço de trabalho
Cozinhar, seja um prato simples ou uma receita mais elaborada, exige organização prévia. Caso contrário, é comum ter de parar tudo na busca de ingredientes ou, até mesmo, desistir do plano inicial. O conjunto de operações que precedem a preparação gastronômica demanda planejamento semelhante do trabalho de execução de uma análise por PCR no laboratório.
Consideramos essa etapa essencial para a eficiência, a qualidade e a acurácia dos nossos resultados finais. Quando tudo está à mão e o protocolo é seguido à risca, erros que poderiam ser fatais para o resultado final são extintos ou minimizados.
Vamos compartilhar, com base nas práticas adotadas pela Simbios Biotecnologia ao longo destes quase 30 anos de atuação, algumas dicas fundamentais para o planejamento e execução da PCR. Confira:
Detalhe a análise por PCR: partindo de um protocolo estabelecido, escreva os reagentes e suas quantidades, as enzimas, amostras e controles que serão utilizados, fazendo os cálculos antes de iniciar o trabalho na bancada. Se prepare para executar à risca o que foi planejado!
Faça um checklist: seja por escrito ou digital, selecione e confira tudo o que vai ser necessário. Evite sentar na bancada, colocar luvas para fazer e, de repente, ser surpreendido com a falta de um reagente ou amostra, por exemplo. Não esqueça de ter pipetas e ponteiras em quantidade suficiente!
Prepare diluições e misturas com antecedência: se possível, já inicie a execução da PCR com tudo pronto, para economizar tempo e ter uma “distração” a menos. Também considere o tempo necessário para descongelar amostras e reagentes.
Identifique bem todos os reagentes e amostras: faça uma boa identificação de frascos, tubos, placas etc. Se possível, faça tudo antes de iniciar o ensaio (escrever em tubos pequenos pode ser demorado e cansativo). E atenção para não trocar tubos! Peça ajuda de um colega para conferir tudo.
Organize a bancada e o espaço de trabalho: deixe tudo limpo antes de iniciar. Ao sentar na bancada para executar o ensaio de PCR, mantenha tudo o que for necessário à disposição, visível e com fácil acesso. Organize os reagentes e amostras dispostas conforme a ordem de adição estabelecida no protocolo e no planejamento da sua análise.
Controle o que já foi adicionado: durante a execução, tenha um método para acompanhar tudo o que já foi adicionado à reação de PCR e o que ainda está faltando. Pode ser um checklist em papel, ou simplesmente colocando em um lugar diferente (por exemplo, passando o tubo já pipetado para uma outra posição no rack). Isto ajuda a não “se perder”, deixando de fora ou adicionando mais de uma vez um reagente ou amostra.
Agilize para levar ao termociclador: logo após adicionar todos os componentes da reação, mantenha em gelo e leve imediatamente ao termociclador para evitar reações inespecíficas. Deixe o programa de amplificação preparado com antecedência.
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